- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
賴(lài)氨酰內切酶（Lysyl Edopeptidase）又稱(chēng)賴(lài)氨酰肽鏈內切酶Lys-C 內切酶，是一種絲氨酸蛋白酶， 最初由Masaki等人從土壤細菌中發(fā)現并分離得到。該酶具有高度特異性，可特異性切割賴(lài)氨酸殘基和 S-氨乙基半胱氨酸殘基羧基端的肽鍵。也有報道稱(chēng)具有微量的非特異性切割。該酶是蛋白質(zhì)序列分析和生物制品生產(chǎn)中非常珍貴的工具酶。該酶可單獨使用，也可以與其它蛋白酶一起使用，經(jīng)過(guò)消化的蛋白可用于肽圖譜分析以及目的蛋白的制備。本品是從重組大腸桿菌中分離純化，再經(jīng)冷凍干燥得到的重組賴(lài)氨酰內切酶粉末。
本品屬于生物化學(xué)級別的基因工程酶，不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制劑，具有天然賴(lài)氨酰內切酶相同的活力和特異性。
- 產(chǎn)品優(yōu)勢
? 無(wú)動(dòng)物源性：無(wú)動(dòng)物病毒、無(wú)致病物質(zhì)、無(wú)外源因子污染，安全性高。
? 純度高：比活高；宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。
? 生產(chǎn)規模 1000L 以上。
? 合規性：生產(chǎn)設備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規要求，符合 GMP 指導原則。
? 質(zhì)量文件完整：按客戶(hù)需求，可提供相關(guān)法規支持文件。
- 產(chǎn)品特性
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性狀 |
白色或類(lèi)白色凍 干粉 |
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等電點(diǎn) |
6.9-7.0 |
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純度 |
分子量為 29.2 kD±2.9kD 的單一主帶(SDS-PAGE） |
| 最佳pH | 8.5-9.5 |
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溶解性 |
在緩沖液中可溶 |
| 比活性 |
不得少于 1.0 AU/mg pro. |
酶活定義：30℃， pH9.5 條件下，每分鐘催化底物生成 1μmol 對硝基苯胺的酶量為 1AU。
- 產(chǎn)品用途
? 酶抑制劑：本品不含 DFP，PMSF，TLCK 等酶抑制劑。
- 反應規程
【蛋白質(zhì)的準備 】
將蛋白質(zhì)溶解在 25mM Tris-HCl，pH9.2 的溶液中。溶解性低或者需要變性處理的蛋白質(zhì)可以用蕞.小體積的 變性劑，如 8M 尿素或 6M 鹽酸胍，在室溫~37℃條件下孵育 1h 使之溶解。需要做二硫鍵還原處理的蛋白質(zhì)可以加入終濃度為 5mM 的 DTT 或β-巰基乙醇，于 50~60℃孵育 20 分鐘使之溶解。調整反應溶液體積使 Tris-HCl 為 25mM，尿素為 1M 或更低，鹽酸胍為 0.1M 或更低。
【酶液準備 】
稱(chēng)取所需的酶粉，用適量緩沖液溶解即得。
【消化反應 】
1g 多肽或蛋白質(zhì)推薦酶的用量在 1~100AU 之間。推薦于-25~37℃反應 2~18h。
如果需要終止反應，可以加入乙酸或鹽.酸調節 pH至酸性。
【注意】 為了獲得最佳的酶切效果，通常需要蛋白處于可溶、變性和二硫鍵還原的狀態(tài)，否則需要加大酶用量。應嚴格控制鹽酸胍和尿素的加入量，尿素高于 1M 或鹽酸胍高于 0.1M 將會(huì )降低重組賴(lài)氨酰內切酶得活力。
- 運輸和儲存穩定性
運輸穩定性：冰袋保溫運輸，活性穩定。
儲存穩定性：凍干粉在-15~-20℃條件下至少能穩定存放24個(gè)月。1mM鹽酸或50mM醋酸溶解后儲存于-15~-20℃，反復凍融10次，無(wú)活性損失。溶解后 2~8℃保存建議不超過(guò)7天 ，溶解后-15~-20℃ 保存建議不超過(guò)30天 。
- 注意事項和免責聲明
? 溫度超過(guò) 37℃本品可能發(fā)生自我消化。在 2M 尿素或 0.1%SDS可保留大部分活力。
? 本品具有吸潮性，應室溫平衡后再取用。
? 本品不得用于臨床診斷和治療。
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